分子生物學實驗室規(guī)劃設計及凈化工程裝修要求
實驗室潔凈工程裝修,實驗室凈化工程設計主要是由我國空氣潔凈等級標準分為:100級、1000級、10000級、100000級等等。標準則劃分為:1級、2級、3級、4級、5級為準。
基因擴增實驗室(PCR實驗室):
PCR是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法,并沒有嚴格的凈化要求,但是為了避免各個試驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排是氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
試劑貯存和準備區(qū):
該實驗區(qū)主要進行的操作作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴格的要求。
標本制備區(qū):
該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為相對于臨近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)域進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區(qū)域內(nèi)不必要的走動。
擴增反應混合物配制和擴增區(qū):
擴增反應混合物配制和擴增區(qū):該區(qū)域主要進行的操作為NDA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可以在本區(qū)域內(nèi)進行。在巢氏PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開反應管。因此巢氏擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區(qū)域內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)域漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行。
擴增產(chǎn)物分析區(qū):
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區(qū)域可不設。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源,因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于臨近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)域擴散至其它區(qū)域。
完備的實驗室配套設施:
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、生物安全柜、離心機、加樣器等。
實驗室凈化工程設計主要是通過人為的手段,應用潔凈技術(shù)實現(xiàn)控制室內(nèi)空氣中塵埃、含菌濃度、溫濕度與壓力、以達到所要求的潔凈度、溫濕度和氣流速度等環(huán)境參數(shù)。空氣潔凈度是指潔凈空氣環(huán)境中空氣含塵量程度,空氣潔凈度的級別以含塵濃度劃分。潔凈度是指每升空氣中所含粒徑≥0.5um的塵粒的總顆粒。
實驗潔凈室一般實施兩級隔離,一級隔離通過生物安全柜、負壓隔離器、正壓防護服、手套、眼罩等實現(xiàn);二級隔離通過實驗室的建筑、空調(diào)凈化和電氣控制系統(tǒng)來實現(xiàn)。但由于凈化空調(diào)需要風量小為了安全起見,風量都按大的估算,一般都要超過規(guī)范規(guī)定,物別是百級以上,冷熱負荷在要求不是很嚴格的情況可能估算,現(xiàn)在專門有凈化空調(diào)機組,可以直接利用。二級~四級生物安全實驗室應實施兩級隔離。一般實驗室裝備有:超凈工作臺、生物安全柜、邊臺或不銹鋼操作臺、洗滌臺等。
以PCR實驗室為例(PCR即聚合酶鏈式反應),是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法,也是生物學、醫(yī)學臨床等領域廣泛應用的實驗技術(shù)。其特點是能將微量的DNA大幅增加,實驗室通常分為四個區(qū)域,即:試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)(如使用全自動分析儀,區(qū)域可適當合并)。進入各個區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時,不得將工作服帶出。
實驗室潔凈裝修,試劑儲存和準備室(標本制備區(qū)),儀器主要配置有:冷凍離心機、生物安全柜、冰箱、可移動紫外燈、全自動力核酸蛋白純化儀、專用工作服和工作鞋等。擴增反應混合物配制和擴增區(qū)配置有:冰箱、高速離心機、超凈工作臺、PCR儀(要求負壓狀態(tài))、可移動紫外燈、微量加樣器、核酸擴增儀等。擴增產(chǎn)物分析區(qū)主要配置有:移液器、振蕩器、超凈工作臺、毛細管電泳儀、冰箱、離心機、微量加樣器、可移動紫外燈等。